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发布时间:2020-08-25 02:49:03
如何预防细胞老化?1. 防止细胞老化主要还是要做到勤观察、勤换液、勤传代、勤保种,特别是传代,不能等细胞太密了之后传,一般细胞建议长到70%融合度传代好。2.在间充质细胞培养时必然要进行消化,但是消化对细胞的表面蛋白质有很强的***作用,因此不能长时间进行消化并且在选择消化酶时也要选择较为合适pH和浓度,不然就会使细胞老化或者分化。2. 在开始养细胞传代时,也要特别注意冻存细胞,以保持细胞有种子存在,可以有效避免细胞损伤。
结合BI生产的基础培养基,Minimal Essential Medium是基本的培养基, 设计之初是为了培养HeLa细胞以及部分哺乳类的成纤维细胞。MEM含有12种必需氨基酸、谷氨酰胺和8种***,适合多种细胞单层生长。以MEM为基础,Stanner利用Earle'sBalanced Salts和非必需胺基酸(NEAA)进一步配制成MEM-Alpha培养基,可广泛用于哺乳动物细胞的培养。
在悬浮培养模式下,细胞可以通过不同的容器进行扩大:摇瓶、玻璃生物反应器、不锈钢生物反应器、培养袋及一次性搅拌容器。有报道采用HEK293T细胞进行扩增、转染、慢病毒生产可以用一次性的生物反应器实现50L的规模。利用悬浮细胞瞬时转染大规模生产慢病毒是可行的,并且显示出良好的产量。但是,在转移到工业生产之前,该技术还需要进一步完善。优化的主要瓶颈是转染过程本身,它需要大量质粒DNA,从而使生产过程极其昂贵。
多肽的稳定性研究,引起多肽不稳定的原因:(1)脱酰胺反应 :在脱酰反应中,Asn/Gln 残基水解形成Asp/Glu。非酶催化的脱酰胺反应的进行。在Asn-Gly-结构中的酰胺基团更易水解,位于分子表面的酰胺基团也比分子内部的酰胺基团易水解。(2)氧化:多肽溶液易氧化的主要原因有两种,一是溶液中有过氧化物的污染,二是多肽的自发氧化。在所有的氨基酸残基中,Met、Cys和His、Trp、Tyr等易氧化。氧分压、温度和缓冲溶液对氧化也都有影响。
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